Elisa實驗洗板前準備

    本生闡述Elisa試劑盒實驗洗板前準備流程

　　一、ELISA操作前準備工作

　　試劑盒的選擇

　　ELISA操作前，應(yīng)做好實驗的設(shè)計、選擇適合自己檢測范圍和靈敏度的試劑盒、提前訂購和準備試劑及耗材、處理樣本等準備工作。

　　樣本處理

　　在收集標本前需有一個完整的計劃，需要清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。ELISA檢測提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮荆埲〔暮螅瑢吮炯皶r分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。

　　二、ELISA標準品溶解

　　標準品是試劑盒的檢測抗原的一個度量標尺，因此標準品的溶解、倍比稀釋和保存要特別注意以下細節(jié)：凍干標準品溶解按照說明書的要求，準確復(fù)溶。在冰上操作標準品為佳，靜止5-10分鐘，輕輕搖勻后按照一次量分裝，在-20度或-70度保存。標準品嚴禁反復(fù)凍融。標準品的倍比稀釋應(yīng)事先做好準備，如離心管的準備和編號以及稀釋液的準備;稀釋時，應(yīng)充分混勻;采用進口或者硅化的EP管，減少蛋白吸附。在實驗孔內(nèi)進行倍比稀釋時，注意操作規(guī)范，槍頭勿刮劃預(yù)包被的孔底。

　　三、ELISA操作中的洗滌

　　洗滌是ELISA實驗中是次數(shù)多的操作，也是非常重要的步驟。不嚴格的洗滌容易出現(xiàn)洗不干凈或交叉污染現(xiàn)象，實驗重復(fù)效果差的現(xiàn)象。不管用多道加樣器、洗瓶、吸管，還是洗板機，嚴格按照說明書操作不要減少步驟洗滌的洗滌體積、洗滌時間和洗滌次數(shù)。注意標準化操作將減少實驗誤差和不同實驗之間的誤差。操作者常出現(xiàn)洗板不干凈現(xiàn)象，請比照“手工洗板小貼士"操作：

　　a)洗液不要溢出孔外，以免污染相鄰的孔，特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度的孔污染了低濃度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定會增高。

　　b)特別注意：設(shè)計實驗的時候要考慮實驗孔的位置，保證甩掉洗液時，空白孔、低濃度孔或陰性對照組在上面或一側(cè)或分開更好。同時注意甩掉洗液的動作翻轉(zhuǎn)(從正上方旋轉(zhuǎn)120-150度)要迅速、干脆。甩板不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來甩液體!甩出后以直線方式補2-3次甩出液體。

　　c)用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導(dǎo)致洗板不干凈，結(jié)果偏高或偏低，重復(fù)孔的數(shù)值也會相差很大。

　　d)每次拍板不要重復(fù)在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟;拍板不宜過輕，否則拍不干凈，拍板很用力不會對蛋白有什么影響。但注意不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，最后一次一定要扣干凈。

　　e)不能減少洗液體積、洗板時間和次數(shù)。洗板時間太短，洗板效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。

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