魚(yú)球蛋白（GLB)ELISA檢測(cè)試劑盒

　　魚(yú)球蛋白(GLB)ELISA檢測(cè)試劑盒本生生物公司供應(yīng)：ELISA試劑盒,動(dòng)物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進(jìn)口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過(guò)濾器,分光光度計(jì)。

　　本試劑盒僅供研究使用

　　檢測(cè)范圍： 96T

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測(cè)定魚(yú)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中魚(yú)球蛋白(GLB)含量。

　　精密度】

　　精密度用樣品測(cè)定值的變異系數(shù)CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

　　批內(nèi)差：取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測(cè)，每份樣本連續(xù)測(cè)定20 次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

　　批間差：選取3 個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測(cè)定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測(cè)定10 次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

　　批內(nèi)差： CV<6.3%

　　批間差： CV<9.5%

　　試劑盒組成：

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

　　7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

　　9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說(shuō)明書(shū) 1 份

　　11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)

　　標(biāo)本要求

　　1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制胎盤(pán)核糖核酸抑止劑(HPRI)活性。

　　操作步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　60 ng/L5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　30 ng/L4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　15 ng/L3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　7.5 ng/L2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　3.75 ng/L1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

　　然后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

　　量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　15 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

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　　操作程序總結(jié)：

　　計(jì)算:

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

　　即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。

　　7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

　　保存條件及有效期

　　1. 試劑盒保存：;2-8℃。

　　2. 有效期：6 個(gè)月

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