小鼠單克隆抗體的制備過(guò)程

　　小鼠單克隆抗體的制備過(guò)程

　　小鼠單克隆抗體制備的核心是通過(guò)?雜交瘤技術(shù)?將免疫小鼠的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能穩(wěn)定分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。以下是關(guān)鍵步驟與要點(diǎn)：

　　1. ?抗原免疫小鼠?

　　抗原選擇?：需高純度蛋白(>90%)或偶聯(lián)載體的小分子抗原(如KLH偶聯(lián)多肽)?。

　　佐劑乳化?：

　　初次免疫?：抗原與弗氏wanquan佐劑(FCA)乳化(油包水狀態(tài))?。

　　加強(qiáng)免疫?：后續(xù)使用弗氏不wanquan佐劑(FIA)或直接注射抗原?。

　　免疫方案?：

　　皮下多點(diǎn)注射(如腋下、腹股溝)，間隔2-4周加強(qiáng)免疫3-5次?。

　　末次免疫后3-5天檢測(cè)血清效價(jià)(ELISA效價(jià)≥1:10,000為合格)?。

　　2. ?細(xì)胞融合與雜交瘤篩選?

　　脾細(xì)胞制備?：處死免疫小鼠，無(wú)菌取脾，研磨成單細(xì)胞懸液?。

　　融合條件?：

　　脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞(如SP2/0)按1:3比例混合，聚乙二醇(PEG)誘導(dǎo)融合?。

　　HAT培養(yǎng)基篩選?：

　　未融合的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞因缺乏HGPRT酶而死亡，僅雜交瘤細(xì)胞存活?。

　　3. ?雜交瘤克隆化與抗體檢測(cè)?

　　有限稀釋法?：將雜交瘤細(xì)胞稀釋至0.5-1個(gè)細(xì)胞/孔，培養(yǎng)后篩選單克隆?。

　　抗體檢測(cè)?：

　　ELISA或Western Blot驗(yàn)證抗體特異性與效價(jià)?。

　　陽(yáng)性克隆擴(kuò)增后，通過(guò)腹水法或體外培養(yǎng)大量生產(chǎn)抗體?。

　　4. ?抗體純化與保存?

　　粗提?：硫酸銨沉淀法濃縮腹水或培養(yǎng)上清?。

　　精細(xì)純化?：Protein A/G親和層析或抗原偶聯(lián)柱純化?。

　　保存條件?：

　　短期：4℃加0.02%NaN?(1-6個(gè)月)?。

　　長(zhǎng)期：-20℃或-80℃分裝凍存?。

　　關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　動(dòng)物倫理?：遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利規(guī)范，減少免疫與采血痛苦?。

　　批次差異?：多克隆抗體易受動(dòng)物個(gè)體差異影響，需嚴(yán)格質(zhì)控(如SDS-PAGE純度檢測(cè))?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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