本生闡述實驗原理：ELISA雙抗體夾心法

　　本生闡述實驗原理：ELISA雙抗體夾心法

　　簡介

　　ELISA 的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

　　ELISA 材料與儀器：

　　(1) 包被緩沖液 (pH 9.6 0.05 M 碳酸鹽緩沖液)

　　(2)洗滌緩沖液 (pH 7.4，0.15 M PBS)

　　(3)稀釋液

　　(4)終止液(2 M H2SO4)

　　(5)底物緩沖液 (pH 5.0)

　　(6)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)使用液

　　(7)2，2’-連氮基-雙-3-乙基-苯丙噻唑啉磺胺(ABTS)使用液

　　(8)抗原、抗體和酶標記抗體：按說明書處理。

　　(9)標準品：用稀釋液稀釋成梯度濃度溶液。

　　(10)96 孔聚苯乙烯塑料板 (酶標板)。

　　ELISA實驗步驟：

　　用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。

　　加入酶標記的抗原或抗體，通過反應也結合在固相載體上。

　　加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

　　酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。

　　某些分泌型蛋白，用siRNA 干擾后可以用ELISA 進行檢測。

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