必知干貨——酶標板的選購要注意哪些方面

　　必知干貨——酶標板的選購要注意哪些方面
 

　　在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時間等條件起著關鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著重要作用。

　　酶標板一般要比細胞培養(yǎng)板貴，細胞板主要做細胞培養(yǎng)，也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板，一般不用做細胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測，需要更高的要求和特定的酶標工作液。

　　一：根據(jù)酶標板底部的不同，可以分為平底、U型底、V型底

　　平底的折射率低，適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標儀上，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應的免疫反應。V底的酶標板可以精確的吸取樣品。

　　二：根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同，分為高結合力、中結合力和氨基化

　　高結合力：表面經(jīng)處理后，其蛋白結合能力大大增強，可達300~400ngIgG/cm2，主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性，并可相對減少包被蛋白的濃度和用量，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應。抗原或抗體包被后，以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。

　　中結合力：經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結合，適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標板所具有的僅與大分子結合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的非特異性交叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

　　氨基化：經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結合;此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。

　　三：根據(jù)顏色分為透明、黑色、白色

　　透明的是常用的，用于最一般的酶聯(lián)免疫實驗。相對于透明的的板子，還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子，一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標板自身會有光吸收，所以它的信號相對于白色的板子要低很多，因此一般用于檢測較強的光，如熒光檢測。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測，常用于一般的化學發(fā)光。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來的問題。有些客戶會問，用一般的酶標板可不可以進行發(fā)光檢測，回答是不可以的，因為一般從化學發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的，也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子，光不僅會從垂直方向發(fā)散，還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁。這樣的話，光較強時相鄰孔之間的影響就會很大，因此不能用透明的酶標板來進行化學發(fā)光實驗。

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